CRISPR基因组编辑技术
CRISPR（群集定期间隔开短回文重复序列）的基因组编辑是一种革命性的方法，其中，可编程RNA靶核酸酶（例如，Cas9），以在基因组中的特定位置。1,2CRISPR-Cas9技术能够使基因元素发生突变、沉默、诱导或替换，其速度、简单性和精确性使其在全球科学界得到广泛应用。
可以在基因组编辑工作流程的各个阶段使用下一代测序（NGS），从而通过对全基因组测序分析CRISPRFRF-TATIVE效应，以确认CRISPR敲除以及具有靶向测序的其他编辑。然后可以使用诸如具有RNA测序的甲基化分析和基因表达分析的应用进行后续研究，以评估给定基因编辑的功能影响。
CRISPR基因组编辑的应用
CRISPR-CAS9技术的应用已经在基础和临床研究，治疗，药物开发，农业和环境领域中确定。临床研究表明，在镰状细胞疾病，癌症，艾滋病，亨廷顿疾病，杜南肌营养不良等疾病中，潜在利用克里普尔在这种疾病中。
CRISPR基因组编辑使研究人员能够快速和精确地创建转基因细胞株和动物模型。除了创造基因敲除和基因敲入外，研究人员还可以使用CRISPR技术在不改变基因组序列的情况下，通过干扰(CRISPRi)或激活(CRISPRa)来调节基因表达。查看相关表以了解更多信息。亚博官网人口yobet亚洲
确认CRISPR淘汰和其他编辑
CRISPR基因组编辑实验导致混合细胞群体，其中只有一小部分携带所需编辑。研究人员需要确定哪些细胞具有所期望的CRISPR基因敲除或有针对性的突变。电流的方法来评估的编辑涉及切割分析，PCR，Sanger测序，和NGS。查看相关表格以获取更多信息。
NGS是唯一唯一在全系列修改的高分辨率下提供定性和定量信息的测定，满足任何吞吐量的需求，可用于监测偏离目标效果。7.基于ngs的靶向测序通过聚焦用于修饰的区域，为确认crispr诱导的编辑提供了一种经济有效的解决方案。
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与ngs克切掉脱离目标分析
CRISP / CAS9技术的成功实施应包括识别和减少偏离目标效果的策略，或者在预期目标以外的网站上的意外修改。评估RNA特异性和预测脱离靶位位点的计算方法通常在基因组编辑实验期间使用。
公开可用的在线工具和基于Web的算法，如“离目标分析工具”表所示。然而，通常需要基于NGS的全基因组测序（WGS）的基因组分析来发现可能逃避预测算法的偏移目标位点。8.
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方法来分析脱靶效应
用于检测CRISPR脱靶分裂位点的基因组NGS方法包括基于细胞的测定（在活或固定细胞中）体外测定。每个分析方法都具有优点和局限性;查看方法比较表以了解更多信息。亚博官网人口yobet亚洲
评估CRISPR基因组编辑的功能影响
科学家可以使用的测序方法广阔剧目来确定基因的结构和功能的编辑序列的影响。通常用于研究基因编辑的功能效果的一些方法包括：
单细胞RNA-Seq
CRISPR修饰后筛选细胞群，以确定许多基因在数千个个体细胞中平行的基因调节影响。
RNA测序
评估突变在转录组上的影响整体或基因/基因家族的表达。
芯片SEQ.
确定基因组编辑对DNA蛋白结合的影响。
甲基化测序
研究突变对甲基化状态和染色质重塑的下游影响。
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在基因组编辑中的NGS更多使用
除了高分辨率导通和截止目标评估和编辑CRISPR的功能分析，NGS可以在CRISPR基因组编辑工作流的另外的阶段被并入。
在初始设计阶段期间，轨迹或基因组的重新排序（用于缺乏参考基因组的物种）可以帮助RNA选择。在克隆CRAP-CAS9 /指导RNA构建体的过程中，所得质粒的重量可以提供CRISPR递送载体的快速和高置信度验证，特别是对于具有大质粒文库的高通量实验。
Francis deSouza，《基因组学、CRISPR和未来》
Illumina公司的总裁兼首席执行官Francis deSouza在科罗拉yobet亚洲多州的Aspen Ideas: Health大会上向观众介绍了基因组学在整个医疗保健领域的影响，以及将基因组学的好处更快地带给更多人的紧迫性。
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