故障排除

• 运行设置问题
• 执行流体检查
• 进行Read 2引物再杂交

运行设置问题

问题	可能的原因	行动
流单元杆是橙色的。	流池没有正确就位。 真空无法密封。 流形没有升起。	拆卸流动池并重复清洗步骤。 确保垫圈是存在的和良好的位置。 重新加载流单元格。
软件没有初始化。	软件无法初始化内部硬件设备。	关闭错误信息，然后重新启动仪器软件。 如果问题仍然存在，重新启动仪表计算机。确保在重新启动计算机时填充了“不弹出”驱动器。 如果重新启动仪器计算机后问题仍然存在，请关闭仪器，至少等待60秒，然后重新启动仪器。
可怜的流体输送。	系统中潜在的泡沫。	重新定位流槽并确认孔正对下来。 在垫圈周围寻找白色沉淀物。如果有沉淀，请更换垫圈。在加载新的流池之前，一定要更换垫圈。 确认吸液器组件完全降低，每个吸液器都与试剂接触。

执行流体检查

“开始”屏幕上的“检查”按钮允许您在未设置运行时执行流体检查。在仪器安装和流体故障排除过程中使用此选项。

1. 在仪器上加载一个用过的流池。
2. 装入8个装有洗涤液或实验室级水的250毫升瓶子，并将瓶子装入相应的试剂架上。把机架装到仪器上。
3. 选择检查在开始屏幕上。
4. 在下拉列表中选择方案5 (SB2)。如果您正在使用安装过的流池进行流体检查，则可以选择溶液2，即水。
5. 默认值如下:卷:250；吸入率:250；分配率:2000。
6. 选择泵。如果需要暂停流体检查，请选择暂停。
7. 目视检查流动单元是否有气泡通过通道和在歧管附近泄漏。
8. 如果你看到过多的气泡，检查垫圈是否有阻碍，将抽吸率降低到100，再泵250µl的水到流动单元。

在HiSeq流单元上执行Read 2重杂交

如果您看到强度在Read 2的第一个周期中显著下降，并且您正在使用HCS v1.4或更高版本，您可以执行Read 2引物重新杂交来挽救运行。在执行此程序之前，请发邮件给Illumina技术支持，以便进一步评估。看到在HiSeq流单元上执行Read 2重杂交。