最佳实践

• 一致性
• 处理磁珠
• 避免交叉污染
• 清洗过程中SPB清理
• 冷冻/解冻少量样本
• 防止PCR产品污染
• Low-Plex池指南

一致性

• 为了确保样品之间的一致性，尽可能使用多通道移液管。定期校准吸量管。
• 将冻融循环次数减少到不超过4次。如果您不打算在一次使用中消耗试剂，在初次解冻后将试剂分配到均分中，并重新冻结均分，以避免过度的冻融循环。然而，如果你进行整除，你可能没有足够的试剂来完成多次反应的全部数量。
• 为了尽量减少人工再悬浮造成的样品损失，使用推荐的平板和平板振动筛来混合样品。

处理磁珠

• 使用前，让珠子达到室温。必要时使用25°C水浴。
• 使用之前，旋涡珠子，直到他们很好地分散和颜色看起来均匀。
• 在样品中加入珠子后，用平板搅拌器在推荐的速度和时间内充分搅拌。在某些步骤中，完全重悬珠对优化性能至关重要，Illumina建议在定时摇动后上下移液10次，以确保样品完全重悬。
• 为获得最佳结果，请将您的珠/样品混合物在室温下孵育整个规程中规定的时间。在推荐的孵育时间后，将珠/样品混合物收集到板底，进行简短的离心。
• 将钢板放置在磁支架上，待溶液清除后再进行操作。在缓慢吸气时，将吸盘放在磁架上，注意不要干扰分离的磁珠。

避免交叉污染

• 样品之间和点胶指数引物之间总是使用新鲜的吸液头。
• 使用协议中规定的方法混合样品。
• 使用耐气溶胶移液头可降低核酸携带和样品间交叉污染的风险。如果没有抗气溶胶的针尖，请小心移液以避免污染。

清洗过程中SPB清理

• 一定要准备新鲜的80%乙醇进行洗涤。乙醇会从空气中吸收水分，影响结果。
• 确保你把所有的乙醇从井底移走，因为它可能含有残留的污染物。使用P20多通道移液管去除残留乙醇，加速干燥。
• 让至少10分钟的干燥时间在磁支架上，在室温下完全蒸发。剩余乙醇会影响后续反应的性能。
• 不要超过推荐的干燥时间，因为过度干燥的样品会对样品恢复产生负面影响。

冷冻/解冻少量样本

• 您的检测试剂盒提供的每种试剂都有足够的容量，可以使用8通道吸管和储液器或8孔带管一次处理试剂盒特定数量的样品。当使用试剂库处理小批量样品时，死体积和移液误差损失会增加。为确保所有样品都有准确的试剂量，用单吸管将试剂注入每孔。
• 为了储存剩余的试剂，Illumina建议冷冻平分，而不是反复冷冻和解冻供应的试剂管。

防止PCR产品污染

• 确保实验室的设置适当，以减少PCR产品污染的风险。有关更多信息，请参见防止PCR产品污染章节Nextera快速捕获富集指南．

Low-Plex池指南

• Illumina使用绿色激光器对G/T进行排序，红色激光器对a /C进行排序。在每个循环中，必须读取每个颜色通道的两个核苷酸中的至少一个，以确保正确的注册。重要的是要为正在排序的索引读的每个基保持颜色平衡，否则索引读排序可能会由于注册失败而失败。
• 方法的“低plex池指南”一节中描述的说明Nextera快速捕获富集指南当池化少于6个库时，要确定哪些库是预先富集的。