全部折叠
|全部展开
是的。然而，我们使用一些商业上可用的小RNA自旋柱纯化方法已经看到了高样本可变性，任何纯化方法的验证可能都是必要的。如果用纯化的小RNA作为起始材料，则应使用10-50 ng。
采用总RNA 1 μg优化方案。
读长的小RNA分子将序列送入适配器。出于这个原因，我们建议只对足够的周期进行测序，以覆盖感兴趣的小rna，或在校准前修剪后期的周期。需要从3'端裁剪的序列在这里给出参考。
TGGAATTCTCGGGTGCCAAGGAACTCCAGTCACnnnnnnATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG
这是索引特异性引物序列的反向补体Illumina适配器序列文档，索引序列表示为nnnnnn。
与任何分子生物学技术一样，方案的改变会带来绝对结果的改变。我们不建议比较不同制备方案之间的绝对计数(或计数归一化为总计数)。然而，比较两种方案的折叠变化应该会产生良好的相关性。