该资源通过在iSeq 100测序系统上为Illumina转换为AmpliSeq的过程提供逐步指导。
Illumina AmpliSeq的总库准备时间为5-7小时。实际操作时间<1.5小时,不包括库量化、标准化和池化。
AmpliSeq for Illumina工作流不需要现场培训。如果您对培训感兴趣,请联系您当地的销售代表以了解有关可用课程的信息。
提供以下在线视频课程:
用于Illumina的AmpliSeq与可用输入量和质量不受限制的样本兼容,例如血液、细胞培养或新鲜冷冻组织,以及具有挑战性的样本类型,例如福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织。DNA和RNA的输入要求从1纳克到100纳克不等,具体取决于应用需要。对于大多数应用程序,我们建议每个池输入10 ng。
DNA纯度的A260/A280比率必须为1.8–2.0。建议使用PicoGreen(DNA)或量子位DNA HS试剂盒进行准确定量。请参阅AmpliSeq面板的参考指南,以确定所需的任何修改。
用于Illumina的AmpliSeq需要用于Illumina面板的AmpliSeq、用于Illumina Library PLUS套件的AmpliSeq以及兼容的AmpliSeq索引套件。Illumina Library PLUS套件的AmpliSeq有24、96和384种反应配置。
有关索引工具包兼容性的信息,请参阅面板的参考指南。
有关所需设备和用户提供耗材的信息,请访问支持页为您的小组。可在每个面板的文档页上找到耗材和设备清单。
Illumina库的AmpliSeq在池化之前手动标准化。
库自动变性为单链,并在仪器上进一步稀释。有关更多信息,请参阅中的群集信息和库稀释部分iSeq 100测序系统指南.
索引是一种标记生物样本的方法,然后使用生物信息学方法来区分运行期间生成的测序数据。
有关详细信息,请参见中的“成对端流单元格上的双索引工作流”(工作流B)部分索引排序概述指南.
通过协议一次可处理1–96个样本。但是,建议使用多通道移液管处理8个样本或8个样本的倍数。
有关支持的索引组合的信息,请参阅索引适配器池指南或者池计算器.
AmpliSeq for Illumina协议中使用的索引适配器是专门为AmpliSeq for Illumina设计的。适配器具有专有设计和修改。Nextera或TruSeq适配器与此协议不兼容。
请参阅本手册的照明面板部分的AmpliSeqIllumina适配器序列文档对于适配器序列和用于Illumina池指南的AmpliSeq部分索引适配器池指南.
Ion-AmpliSeq协议和AmpliSeq for Illumina协议之间存在一些重要差异,例如增加了放大和清理步骤。要成功使用AmpliSeq for Illumina协议,请查看并遵循AmpliSeq for Illumina参考指南中的说明。
有关热循环器的建议,请访问支持页用于照明面板的AmpliSeq。可在每个面板的文档页上找到耗材和设备清单。
有关详细信息,请查看测序:Illumina技术视频或参考下一代测序技术简介.
iSeq 100系统需要iSeq 100 i1试剂盒。有关所需用户提供耗材和设备的信息,请参阅iSeq 100测序系统指南.
请参阅中的设置顺序运行(本地运行管理器模式)或设置顺序运行(手动模式)部分iSeq 100测序系统指南.
你可以使用iSeq 100系统样本表模板创建样本表。在手动模式下使用BaseSpace Sequence Hub运行监控和存储进行排序时,需要样本表。下载并编辑样本表,然后在运行设置期间将其上载到控制软件。
最佳排序深度取决于您正在运行的应用程序和您的实验目标。有关适用的参考研究,请参阅文献。
对于面板的长度和应用,建议使用2x151 bp。
请参阅中的准备序列库和群集生成部分iSeq 100测序系统指南.
参见技术公告PhiX Control v3库是什么?它在Illumina NGS中的功能是什么?
请参阅中读取部分的循环数iSeq 100测序系统指南.
成对末端测序允许用户对片段的两端进行测序,并生成高质量、可对齐的序列数据。配对末端测序有助于检测基因组重排和重复序列元件,以及基因融合和新转录本。
因为成对的结束读取更有可能与引用对齐,所以整个数据集的质量会提高。所有Illumina下一代测序(NGS)系统都能够进行配对末端测序。Illumina建议对Illumina库的AmpliSeq进行配对末端测序。
有关更多信息,请参阅Illumina网站以及在系统的成对端流单元(工作流B)部分上的双索引工作流索引排序概述指南.
图案化流动池在流动池的两个表面的固定位置包含数十亿个纳米孔。结构化组织提供了均匀的序列簇间距,与非模式簇生成相比具有显著优势。
参考序列数据分析中的关键概念介绍网络研讨会,介绍和讨论分析Illumina测序数据时使用的概念和一般方法。本网络研讨会面向Illumina NGS新用户,涵盖从头组装、RNA测序和SNP发现中使用的基本分析方法。网络研讨会还介绍了实验设计的基本概念。
本地运行管理器是用于Illumina工作台测序数据的基于Windows的软件,包括本地分析选项、运行和用户管理。
这个本地运行管理器网络研讨会提供本地运行管理器的概述,面向新用户和中间用户。有关详细信息,请查看本地运行管理器支持页面和本地运行管理器概述培训班。
本地运行管理器设备和计算要求可在本地运行管理器软件指南.
有关设置本地运行管理器的信息,请参阅序列文件格式这个用于数据分析网络研讨会的FASTQ处理工具,以及本地跑步经理介绍网络研讨会.
BaseSpace Sequence Hub是基于Illumina云的测序数据分析解决方案。有关运行和项目之间的差异、使用数据以及共享数据等信息,请参阅BaseSpace序列中心网络研讨会. 有关更多信息,请参阅基空间序列集线器支持页面和使用BaseSpace Sequence Hub准备运行培训班。
请参阅以下资源:
DNA扩增子和RNA扩增子应用程序都可以通过BaseSpace Sequence Hub获得。