最佳实践
确保一致性
- 为了确保样品的一致性，尽可能使用多通道移液管。定期校准吸量管。
- 当进行少于96个样本的实验时，为了避免不必要的冻融循环，Illumina建议在第一次解冻后，对通常保存在冷冻状态下的较小体积的试剂进行分割。
避免交叉污染
- 添加或转移样品时，每个样品之间要更换针尖。
- 在添加适配器或引物时，在每行和每列之间更改提示。
- 从工作区域移除未使用的索引适配器管。
- 在样品之间和分配指数引物之间总是使用新鲜的吸管头。
- 用多通道移液管混合样品，并在指示时离心平板。不要使板产生涡流。
- 小心移液管，避免外溢。
- 在处理不同的适配器支架时，要清洁移液管并更换手套。
- 在操作前后彻底清洁工作表面。
密封板
- 在执行以下步骤之前，请始终密封96孔板:摇动步骤、涡流步骤、离心步骤和热循环步骤。
- 将胶封盖在印版上，用橡胶辊密封。
- 微密封“B”胶密封在-40°C至110°C有效，适用于裙边或半裙边PCR板。使用微密封'B'振荡、离心和长期储存。
- 微密封“A”胶膜对于热循环是有效的，并且在使用少于96口井时易于切割。
板转移
- 在板间转移体积时，将规定的体积从板的每一个孔转移到另一个板的相应孔。
- 如果小珠被吸进移液器的尖端，将小珠放回磁性支架上的平板上，等待液体变清(~2分钟)。
离心分离
- 在操作过程中的任何一个步骤中，离心以巩固井底的液体或颗粒，并防止样品丢失。
- 制粒时，280 × g离心1分钟。
处理磁珠
- 使用前，让珠子达到室温。
- 在使用前，旋涡使珠子充分分散。确保液体的颜色看起来均匀。
- 为避免样品丢失，请确认在重新悬浮和混合步骤后，移液管尖端没有珠子残留。
- 移液管珠慢慢悬浮。
- 搅拌时要充分搅拌。
- 让混合样品在室温下孵育，按照协议规定的整个时间，以确保最大回收率。
- 当清洗珠:
- 使用合适的磁铁来吸引印版。
- 分散液体，使井边的珠子被浸湿。
- 将磁片放在磁铁上，直到指示指定将其取出。让它在室温风干，以防止潜在的珠损失由于静电的力量。
- 在磁性支架上时，不要搅动金属板。不要干扰珠子颗粒。
- 为防止洗脱后珠粒残留，洗脱液从珠粒中去除时，留下约2.5 μl上清。
- 总是准备新鲜的60%或80%的乙醇。乙醇容易从空气中吸收水分，因此，应新鲜制备60%-80%的乙醇，以达到最佳效果。
- 一定要把所有的乙醇从井底除去，因为它可能含有残留的污染物。
- 用单通道或多通道吸管重新悬浮干燥的颗粒。
- 当从孔中取出和丢弃上清液时，使用单通道或多通道吸管，注意不要干扰珠子。
- 为了在洗脱过程中最大限度地提高DNA回收率，将DNA/珠子混合物在室温下孵育2分钟，然后将样本放在磁铁上。