类型的DNA |
支持的Amplicon尺寸(bp) |
DNA质量 |
△Cq |
输入(ng)1、2 |
基因组DNA |
150、175、250 |
高 |
N/A |
10 |
FFPE基因组DNA |
150年,175年 |
高 |
1 - 1 |
10 |
媒介 |
> 1.0 - 2.5 |
20 - 50 |
||
低 |
2.5 - 4.0 |
50 - 100 |
1输入量取决于△Cq。有关更多信息,请参见TruSeq FFPE DNA Library Prep QC参考指南(文档# 1000000002136).
2更大的输入会增加库的产量,并改善测序指标,如特异性(对齐读取的百分比)。
使用基于荧光的定量方法量化起始基因组材料,如Qubit dsDNA Assay Kit或PicoGreen,而不是基于紫外光谱仪的方法。基于荧光的方法,采用双链DNA (dsDNA)的特定染料,即使在许多常见污染物存在的情况下,也能具体准确地量化dsDNA。相比之下,基于260 OD读数的紫外光谱仪方法容易高估DNA浓度,因为RNA和其他基因组DNA (gDNA)制备中常见的污染物的存在。
使用TruSeq FFPE DNA Library Prep QC Kit(目录# FC-121-9999)确定FFPE DNA质量和TruSeq Custom Amplicon Low input Library Prep Kit的输入量。
根据DNA类型和质量,量化并稀释DNA到所需的输入量。你可以稀释并储存更多的DNA,以备以后使用。在RS1和SS1中稀释DNA,并按照定量和稀释DNA部分的描述存储TruSeq自定义Amplicon低输入库准备参考指南(文档# 1000000002191)。