最佳实践
确保一致性
- 为了确保样品之间的一致性，尽可能使用多通道移液管。定期校准吸量管。
- 当进行少于96个样品的实验时，为了避免不必要的冻融循环，Illumina建议在第一次解冻后，将通常保存的更小体积的试剂冷冻保存。
避免交叉污染
- 样品之间和点胶指数引物之间总是使用新鲜的吸液头。
- 用多通道移液管混合样品，并在指示时将平板离心。不要涡流板。
- 吸液时要小心，以免溅出。
- 清洁移液器，在处理不同适配器时更换手套。
- 在手术前后彻底清洁工作表面。
处理磁珠
- 使用前，让珠子达到室温。
- 在使用之前，旋涡搅打珠子，直到它们完全分散。液体的颜色应该是均匀的。
- 注意尽量减少可能影响最终产量的珠损。
- 更改每个样本的提示。
- 让混合样品在室温下孵育，以便在协议中规定的全部持续时间，以确保最大恢复。
- 从反应板和洗涤步骤中抽吸清除的溶液时，重要的是要使反应板保持在磁架上，不要干扰分离的磁珠。缓慢地吸气，以防止珠子从孔的侧面滑下来，进入移液管的尖端。
- 为了防止洗脱后珠子的携带，当从珠粒沉淀中除去洗脱液时，留下约2.5μl上清液。
- 一定要准备新鲜的80%乙醇。乙醇容易从空气中吸收水分，因此，为了达到最佳效果，80%的新鲜乙醇应采用新鲜的。
- 一定要从井底除去所有乙醇，因为它可能含有残留的污染物。
- 将反应板放置在磁支架上，室温风干，防止静电造成的磁珠丢失。允许残留乙醇的完全蒸发，因为乙醇的存在会影响后续反应的性能。Illumina建议至少15分钟的干燥时间，但可能需要更长的干燥时间。
- 用单通道或多通道移液管重悬干燥的颗粒。
- 从孔中取出和丢弃上清液时，使用单通道或多通道移液管，注意不要干扰珠。
- 为了在洗脱过程中最大限度地恢复DNA，在将样品放在磁铁上之前，将DNA/珠混合物在室温下孵育2分钟。