输入要求

福尔马林固定的石蜡包埋（FFPE）人组织是分子分析和临床研究的有价值的材料来源。现在存在来自FFPE样品的核酸的萃取和纯化的许多方法和方案;然而，由于用于评估DNA和RNA的测定从简单的Monoplex PCR进化到较高的吡咯产品，因此从FFPE材料中提取的核酸的质量和量对这些测定的成功变得更为重要。

Trusight肿瘤测定可用于产生在目标和样品水平的高度复用的测序文库。通过将寡聚延长/连接过程与通用PCR组合来实现高水平的测定复杂性。这两种反应都需要大量完整的DNA模板，其可以变性。福尔马林固定和嵌入组织的嵌入通过碎片，交联和通过各种化学修饰来破坏DNA来影响这一要求。评估这种损伤的程度并调整DNA提取程序尽可能地补偿它至关重要，这对于提高Trusight肿瘤样品制备测定与FFPE DNA的成功是必不可少的。

DNA提取建议

Illumina公司建议QIAGEN补充方案：使用QIAAMP DNA FFPE组织试剂盒和脱蛋白化溶液纯化基因组DNA。出于从FFPE组织块中提取最高量的可增换DNA的目的，具有以下修改：

• 从8个5 μM FFPE组织切片中提取gDNA。
• 用320 μl Qiagen脱亲和液脱亲和。
• 用蛋白酶k消化在热膜中以1000rpm过夜。
• 将洗脱体积减少至30μL以最大化DNA浓度。