シーケンスのランのフォーカスエラーはMiSeqで頻繁に発生するトラブルのひとつです。ランの1サイクル目で図1のようなエラーが出てしまった場合には,フローセル上のクラスターにフォーカスが合わせられず,データが取得できない状況を示しています。
図1
フォーカスエラーの原因としては,
- ライブラリーの構造や変性・希釈に問題があり,クラスターが形成されていない
- クラスターは形成されているが,オーバークラスターの状態や,また装置の光学系に問題がありクラスターの検出ができない
などいずれの場合でも発生するため,フローセル上にクラスターが形成されているのか,いないのかを確認することが,迅速にトラブル原因を特定するために重要です。
フォーカスエラーが発生した場合,使用したフローセルを运行后洗には使用せず,フローセルが入っていたバッファーの入った容器に戻し,アルミ箔等で遮光して,冷蔵での保存をお勧めします。
运行后洗はお手元の別の使用済みフローセルを装置に置き換えて実施してください。
MiSeqのフローセルの容器
ラン終了時まで,中のバッファーを捨てずにとっておいてください。
フローセルを保存しておいていただけると,MiSeqにインターネット接続がある場合,装置に搭載されているリモート診断ツール(GoToAssist)を用いて,フローセル上にクラスターが形成されているか,弊社テクニカルサポートによる確認が可能です。
また,インターネット接続がない場合でも,弊社スタッフの訪問時に同様の操作が可能です。
その他,MiSeqで発生するフォーカスエラーの原因と対処法は,下記ウェビナーをご参照ください。
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