唯一分子标识符(UMIs)是一种分子条形码,在测序过程中提供纠错和提高准确性。
这些分子条形码是用来唯一标记样品库中每个分子的短序列。UMIs用于广泛的测序应用,许多围绕DNA和cDNA的PCR重复。UMI重复数据删除也可用于RNA-seq基因表达分析和其他定量测序方法。
使用UMIs测序可以减少假阳性的变异呼叫率,提高变异检测的灵敏度。由于起始材料中的每个核酸都有独特的分子条形码标记,生物信息学软件可以高精度地过滤掉重复reads和PCR错误,并报告独特的reads,在最终数据分析之前消除已识别的错误。
虽然这两种技术都可以用于下游数据分析中的多路复用和解路复用,但关键的区别在于UMI测序在PCR扩增之前用独特的序列标记样品中的每个分子。
对于惟一的双索引,每个示例索引都特定于给定的示例库。样品中的所有核酸都用相同的序列标签进行标记,得到的文库与其他文库合并,并在单次运行中并行测序。
UMIs将一个独特的条形码整合到给定样本库中的每个分子上。通过在每个原始DNA片段上合并单独的条形码,可以将原始样本中存在的变异等位基因(真正的变异)与文库制备、靶富集或测序过程中引入的错误区分开来。
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