故障排除
如果出现以下情况，请参考以下解决方案和解决方法：Infinium测定化验以一种意想不到的方式进行。如果无法使用本指南解决问题，请联系illumina技术支持。
预杂交
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症状 |
可能原因 |
决议/评论 |
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1 |
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将板倒置几次，然后再次离心。 如果出现颗粒，则在离心之前不会混合溶液。如果没有出现颗粒，则原始DNA样品可能降低。 注意：如果样品被降解，重复正在执行的方案中的扩增DNA（制作）步骤。 检查井以在20分钟离心前完全混合。 |
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未添加PM1或2-丙醇。 |
将丢失的试剂添加到孔中。 转换板几次并再次离心板。 检查井以在20分钟离心前完全混合。 |
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2 |
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样品丢失了。重复您正在执行的协议的扩增DNA（make）步骤。 检查离心机程序，确保选择了正确的速度。 |
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3. |
形成在井底的气泡，防止颗粒与Ra1混合。 |
脉冲离心板180×g去除气泡，然后在1800 rpm卷曲板1分钟。 |
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涡旋速度不够快。 |
检查涡流器速度设置，因为速度设置可能随时间漂移。如有必要，重新校准。 以1800转/分的转速旋转平板1分钟。 |
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反应板不足够长孵育。 |
将培养皿再培养30分钟。 确保盖子正确坐着以防止蒸发。 |
杂交到X污染
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症状 |
可能原因 |
决议/评论 |
1 |
解冻后，确保将试剂管离心至280×g。 |
检查移液管校准。使用水进行重量分析测试是一种快速简便的方法，可用于检查移液管分配量是否准确。 每年重新校准移液器。 |
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可编程移液器可以设置不正确。 |
检查可编程移液器是否有被丢弃的过量容量。 |
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2 |
应使用箔热封剂。 |
样品被破坏了。重复实验。 所有温度≥45°C的铝箔热封剂。 |
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3. |
少量沉淀是正常的，并且不会影响数据质量。 |
继续实验。 |
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4. |
珠子必须干燥更长的时间。 XC4可能是旧的，必须用新鲜的XC4替换。 一瓶乙醇可能吸收大气水。用新鲜的乙醇更换。 |
在真空干燥器中干燥珠片。 实验室温度和湿度影响干燥时间。 |
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5. |
在涂覆过程中，珠片之间形成气泡，阻止XC4溶液到达表面。 |
简要将染色齿条用珠子返回含有XC4的洗涤盘。 轻轻地移动珠芯片，同时上下移动，打破解决方案的表面。 在处理16或24颗珠子时，前后移动尤其重要。 |
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6. |
在X扫描过程中，流经腔室的液体下降到玻璃背板储液罐底部边缘以下。 |
玻璃背板可能没有完全清洁，导致毛细血管间隙失效。 |
在重新组装流经腔室的流量之前，清洁玻璃背板。 |
如在测定的参考指南中所述将金属夹持物连接到流过室。 |
成像
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症状 |
可能原因 |
决议/评论 |
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1 |
这扫描仪在扫描期间无法找到所有基准。 |
XC4涂层未从珠片边缘正确去除。 |
用ProStat-EtOH湿巾重新连接晶片边缘并重新扫描。 |
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珠片在珠片托架中未正确入位。 |
重新安装珠片托架中的珠片。 |
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2 |
不存在强度图像可能是由于在扫描上游的任何实验步骤中的故障。 |
重复实验。 检查染色控制。如果控制不产生信号，则染色试剂可能会受到损害。 |
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3. |
伴随着独立于样本的控制信号的正常性能的低测定表示采样依赖性故障。在扩增和杂交之间的任何实验步骤中可能发生错误。 |
重复实验。 确保沉淀后存在DNA颗粒。 在重新悬浮期间，确保DNA颗粒正确溶解。颗粒中的蓝色应该消失。 |
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4. |
低分析信号伴随低样本独立对照表明与分析处理相关的样本独立故障。错误可能发生在杂交后。 |
要消除扫描仪作为问题，请确保同时扫描的其他芯片或在相同的批处理中产生正常测定信号。如果其他芯片显示相同的低信号，请联系illumina为分析GenomeStudio中的数据提供技术支持，以确定可能的根本原因。 |
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5. |
珠子上的一些斑点具有低至0强度。 |
试剂中的气泡可以通过防止试剂到达珠芯片表面来引起这种现象。 |
使用前对所有试剂管进行离心，以防产生气泡。 在运行实验之前，始终执行系统冲洗。 （珠芯片上的低至0强度区域可能对由于随机性和珠芯片的过采样产生的阵列数据可能没有负面影响。） |
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6. |
扫描仪返回红色条纹，表示扫描失败。 |
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将芯片移动到载体和重新扫描中的另一个位置。如果这失败，请联系illumina技术支持。 |
