各种各样的DNA和RNA样品类型和提取方法都可以为酶反应引入抑制剂。如果不适当去除抑制剂，可能会对许多类型的酶反应产生负面影响，包括逆转录、末端修复、A-尾、适配器连接和PCR。本公告概述了在使用Illumina文库制备试剂盒制备文库之前，分离和纯化DNA和RNA的重要注意事项。

哪些抑制剂值得关注?

一些抑制剂或污染物是样品类型或样品来源所固有的，如血液中的血红蛋白或植物样品中的腐殖酸/黄腐酸。其他通过样品处理或提取方法引入，如EDTA、肝素或苯酚:氯仿。

抑制剂可以阻止酶与目标底物结合(例如，包裹DNA/RNA的蛋白质从而阻止酶的结合)，降低酶的功能，或降解酶本身(例如，蛋白酶，洗涤剂，苯酚和pH值)。

如果我怀疑或检测到DNA/RNA样本中的污染物，该怎么办？

预防酶抑制或损害性能的最佳方法是将仔细样品处理与优化的提取方案处理，以有效地纯化无抑制剂的核酸。洗脱或重悬核酸后样品的最终pH应在7.0-8.5的范围内。

Illumina建议使用紫外分光光度法进行纯度评估，并使用基于荧光法的方法（如量子比特法或微微/核糖绿法）进行核酸定量。评估溶液中核酸纯度的最常用方法是通过紫外分光光度法测量260/280和260/230比率：

在不同的样品类型中发现了哪些抑制剂？

样本源 抑制剂	抑制作用	可能的来源	减少抑制的方法
多糖	模板 封锁	植物	高盐沉淀，CTAB缓冲液，氯仿提取， 果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶、α-淀粉酶消化
蛋白质	模板 封锁	结缔组织皮肤 组织，牛血清白蛋白， 免疫球蛋白	使用SDS, CTAB或胍缓冲液，蛋白酶K， 基于二氧化硅的纯化
脂肪	模板 封锁	脂肪组织； 甘油	Upase或己烷处理和氯仿提取， 基于硅的提纯
胆盐	模板 封锁	粪便,凳子	用70%乙醇洗涤或使用硅基净化
胶原蛋白	模板 封锁	结缔组织皮肤 组织	使用SDS, CTAB或胍缓冲液，蛋白酶K， 基于二氧化硅的纯化
血红素	竞争 MgCl2	血	用70%乙醇洗涤或使用硅基净化
腐殖酸	螯合的 金属离子	土壤、植物材料	用70%乙醇洗涤或使用硅基净化
黑色素和 eumelanin	酶绑定/ 模板阻塞	头发、皮肤	用70%乙醇洗涤或使用硅基净化
肌红蛋白	螯合的 金属离子	肌肉组织	用70%乙醇洗涤或使用硅基净化
复杂的 多糖	模板 封锁	粪便、植物材料	高盐沉淀，CTAB缓冲液，氯仿提取， 果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶、α-淀粉酶消化
蛋白水解酶	模板 封锁	牛奶	只使用不作为模板或阻塞的载体 模板，如线性丙烯酰胺、N-或P-载体
钙离子	竞争 MgCl2	牛奶，骨头	用70%乙醇洗涤或使用硅基净化
尿素	酶 变性	尿液	用70%乙醇洗涤或使用硅基净化
血红蛋白， 乳铁蛋白	竞争 MgCl2	血	用70%乙醇洗涤或使用硅基净化
免疫球蛋白G. (免疫球蛋白)	模板阻塞	血	使用SDS, CTAB或胍缓冲液，蛋白酶K， 基于二氧化硅的纯化
靛蓝染料; 丹宁酸	模板阻塞	特定植物	用70%乙醇洗涤或使用硅基净化

在不同的样品处理/提取方法中发现了哪些抑制剂?

治疗/提取 方法结转	抑制作用	可能的来源	减少抑制的方法
乙二胺四乙酸	螯合的 金属离子	TE缓冲	减少TE缓冲液中的EDTA浓度或仅使用TRS-HCl（10mm） 或核酸酶免费水作为洗脱缓冲液
酒精	酶变性	异丙醇,乙醇 异戊醇	干燥颗粒和重悬或使用硅基净化
过多的盐	模板 封锁	KC;生理盐水, CSCL，Naac.	用70%乙醇洗涤或使用硅基净化
旋流盐	酶变性	氯化胍； 氯化镁、尿素	用70%乙醇洗涤或使用硅基净化
苯酚:氯仿	酶变性	有机结转	使用PVP, PVP/醋酸铵，合并 DNA提取步骤中为1.2％柠檬酸
洗涤剂/滴滴涕	酶变性	钠脱氧胆酸盐, SDS，吐温20， Triton X-100	用70%乙醇清洗
蛋白酶	蛋白质退化	蛋白酶K.	苯酚：氯仿EXT，然后是基于二氧化硅的纯化
核酸酶	模板降解	限制酶， 微球菌的核酸酶,S1	在蛋白质沉淀过程中使用B-ME，EGTA或SDS
外生的 DNA / RNA	模板竞争	结转	用于DNA去除的DNase I;RNase A用于RNA、RNA:DNA杂化去除
航空公司	模板 竞争/阻止	RNA,肝素,糖原	仅使用不作为模板或模板的载体 阻断模板，如线性丙烯酰胺，N-或P载体
琼脂糖	模板 封锁	凝胶的抽取	使用自旋柱加向潮盐缓冲液;透析
过量金属离子	减少低聚糖的专一性	毫克的+ + PCR缓冲液	针对PBS（pH 7.4）的透析，苯酚：胆红素萃取 其次是ettoh沉淀

如何去除DNA/RNA样本中的污染物？

如果样品有污染物影响下游的酶反应，额外的净化步骤，如基于过滤器的旋转柱再净化可能有助于去除污染物和/或样品的浓度。

注意，该清单不包括酶促反应的所有可能抑制剂，而是源自样品源或样品处理/提取方法的最常见污染物。