最好的专注,没有可用的信号错误是什么?

未发现“最佳焦点”,“最佳焦点太靠近边缘的范围,”或者“没有找到可用的信号,它是可能的聚类有失败,“错误发生在第一次循环的成像MiSeq表明可能存在集群强度不足的工具找到最好的飞机焦点。

可能的仪器的原因包括:

• 可怜的化学试剂参与集群的一代或一垒
• 流通池温度控制问题
• 光学系统问题(很少)

可能的图书馆和试剂的原因是:

• 使用过期或不当存储试剂
• 库设计和/或质量/量化问题
• 穷人读1底漆杂交由于图书馆设计问题
• 使用不兼容的引物
• 下,或者overclustering

故障诊断最好专注,没有可用的信号错误

确保仪器的流体,温度和运动系统执行如预期的那样,首先执行系统检查仪器,如所描述的MiSeq系统指南:

1. 执行运行清洗后的提示的乐器
2. 动力循环系统中描述的工具指南
3. 去管理工具,然后单击系统检查
4. 选择所有运动测试,主要试剂,热增加,和体积测试

一旦测试完成,点击显示在屏幕的左下角细节结果的完整清单。如果音量测试失败PR2位置以外的任何位置,或者任何其他测试失败,邮件Illumina公司技术支持techsupport@illumina.com为进一步援助。

如果系统检查通过,失败可能是由于一个问题库或试剂。调查中最常见的问题:

• 检测试剂盒产品有效期和适当的存储
• 确保图书馆设计兼容Illumina公司平台上运行
• 检查的质量和量化图书馆使用Illumina-recommended方法
• 确保自定义引物兼容65 c MiSeq退火温度
• 确保自定义引物被添加到正确的弹药井(上升到现有的引物井与纸样没有变化,或添加到自定义底漆井与纸样显示自定义使用引物)

如果没有明显的问题库或试剂,重复运行PhiX控制飙升了20%。这将作为一个积极的控制集群未来运行来确定前面的错误是由于一个底层库的问题。

如果没有额外的可用信号或最佳焦点错误发生在下一次运行周期1,通过techsupport@illumina.com联系Illumina公司技术支持为进一步援助。

额外的资源:

MiSeq系统定制的引物指南
MiSeq系统变性和稀释库指南