使用MiSeq Reporter解决解复用问题

03/09/20


MiSeq记者分析软件输出名为emultiplexsummaryf1l1.txt的解复用摘要文件,该文件可用于排除多路分解问题。

DemultiplexSummaryF1L1.txt文件在哪里?

    FASTQ文件生成完成后,demultiplexysummaryf1l1 .txt文件位于:
    < >运行文件夹\ \强度\ BaseCalls \对齐数据。

在emultiplexsummaryf1l1.txt文件中有哪些信息?

    这个DemultiplexSummaryF1L1.txt文件有两个部分。顶部部分(图1)是一个以制表符分隔的表,它总结了每个平铺的解复用结果。在表格的左侧是流单元格上的块列表。在表格的顶部,样品是按照它们进入样品表的顺序列出的。样本0总是保留给未确定的读取。这个表显示了每个样本、每个贴图的读被多路复用的百分比。一般来说,对于给定的示例,在所有tile中解复用读的百分比应该是相似的。瓦片摘要信息可用于识别瓦片特定的解复用问题。

图1:平铺摘要部分显示了对每个平铺的每个样本进行多路复用的读的百分比。

demultiplexsummaryf1f1 .txt文件的第二部分(图2)列出了index Read 1和index Read 2的100个最常见的索引序列(无论是已分配的还是未确定的),以及每个索引被找到的次数。该列表还显示了找到的索引序列的反向补码(仅供参考)。在demutiplexsummaryf1f1 .txt文件中,索引序列中的句号(…)表示MiSeq上的base调用软件不能进行base调用的位置。

图2:DemultiplexSummaryF1L1.txt文件中最流行的索引序列部分列出了找到的前100个索引1和索引2序列。

在解决多路复用问题时,可以使用索引序列列表来比较预期的索引序列(样本表中的)和发现的索引序列。

解复用差的一些常见原因这个列表可以揭示:

  • 在样本表中输入的索引序列方向错误。
  • 在样本表中输入错误的索引序列(例如,Nextera vs TruSeq HT,或索引A001 vs索引A006)。
  • 车道之间的样本混合。
  • 较差的索引读取测序质量(例如,包含大量频率的索引序列,表示列表顶部附近的“无需呼叫”)。