生成FASTQ文件是可能的,即使MiSeq运行没有完成。为此,使用完整的*集确定最后一个循环。BCL文件、修改运行文件和requeue分析。这个公告描述了如何使用MiSeq Reporter从一个不完整的运行中生成FASTQ文件。
在开始之前:
- 如果您计划对MiSeq进行二次分析,请确保测序运行没有在进行中,并且MiSeq Reporter已准备好进行分析。
- 如果您选择BaseSace,则无法从部分运行中生成FastQ文件,并在BaseSpace中保存分析。分析必须在本地进行。
- 如果运行在完成索引读取之前就停止了(例如,在Read 1中),就不可能对你的样本进行多路复用。
- 确保RTAComplete.txt文件是不在运行文件夹中。
步骤:
- 去D:\ illumina \ miseqanalysis \ \ data \ contenties \ basecalls \ l001并检查哪个周期是生成所有* .bcl文件的最后一个循环。如果使用V3试剂,则每个周期有38 * .bcl文件。如果使用V2试剂,则每个周期有28 * .bcl文件。
*如果.bcl文件不存在,可以通过手动启动RTA来恢复它们。要做到这一点,请联系Illumina技术支持.
计算已成功完成并提取了多少个周期。
例如:
在2 x 150 + 6 bp索引运行中,运行在循环207停止。如果具有完整* .bcl文件的最后一个周期是循环206,它是一个很好的拇指规则,不能用完整的* .bcl文件推动最后一个周期。从中选择以前的完整周期来进行分析。在这种情况下,它是循环的205。运行故障是(R1)150 +(R2索引)6 +(R3)4 = 205周期。
- 备份原RunInfo.xml和SampleSheet.csv将文件重命名为RunInfo.xml.BAK和SampleSheet.csv.BAK.使用记事本编辑这些文档,并将编辑后的文档保存为RunInfo.xml和SampleSheet.csv在miseqanalysis中的根运行文件夹中。如果在以下示例中的配对结束运行读取3的反向读取 - 尚未执行,则删除相应的行RunInfo.xml和SampleSheet.csv.
例如:
- RunInfo.xml:
<读取>
读< / >
- SampleSheet.csv:
- 复制一个RTAComplete.txt文件,并将其粘贴到您的运行文件夹。
- 您可以期待在MiSeq Reporter和A中看到排队的运行QueuedForAnalysis.txt在miseqanalysis中的运行文件夹中创建的文件。要确保在MiSeQ Reporter中重新排列运行,请指向Web浏览器窗口http://localhost:8042在以。开始的列表中寻找您的运行分析按钮。