当在长时间关闭或不活动后返回实验室时,重要的是要确保所有实验室资源都已启动和运行,并准备好使用。以下是检查文库准备、测序和微阵列试剂和仪器以确保成功重新开放的最佳做法。
实验室和试剂检查|测序仪器的考虑|图书馆准备注意事项|英飞纳姆™试验注意事项
实验室和试剂检查
用10%的漂白剂擦拭所有实验室表面,去除任何积聚的灰尘或污染物。
- 特别注意典型的“热点”:
- 用于处理扩增DNA的工作台
- 门把手
- 冰箱和冰柜的门把手
- 电脑键盘和鼠标
- 离心机,涡旋器和热循环器
- 清洁任何前置放大器区域的所有设备(包括移液器)
- 参阅公告氨基清洁产品对顺序运行性能的影响额外的细节
试剂、试剂盒和用户提供的材料的正确储存和处理应按照文件化的程序进行。
检查用于文件存储(输出运行文件夹、清单文件、集群文件、dmap)或数据处理(IDAT存储库)的网络驱动器或服务器的连接性。
测序仪器的考虑
仪器系统指南:iSeq™100|MiniSeq™|MiSeq™|nextseq™500/550|NextSeq™1000/2000|HiSeq™1000/1500/2000/2500|Hiseq™3000/4000|HiSeq™X|NovaSeq™6000
对于留在上面的乐器:
- 确认建议的维护/手册/备用清洗是按照适当的系统指南进行的。
- 请按照系统指南中的步骤进行满电操作。
- 关闭系统至少5分钟后再重新上电。
注意:iseq™100和nextseq™1000/2000没有机载流体,建议这些仪器也采用动力循环。
关闭的仪器:
- 打开仪器电源,确保控制软件初始化。
- 执行两次维护/手动清洗,使流体系统重新水合物(不包括iSeq 100和NextSeq 1000/2000)。
注意:如果在关闭仪器之前没有使用实验室级水进行额外的维护/手动/备用清洗,则执行三次维护/手动清洗以使流体系统重新水合物,然后运行系统检查以测试流体输送。系统检查的细节可以在适当的系统指南中找到。
图书馆准备注意事项
开始一个新的图书馆准备
当开始准备新的库时,Illumina建议检查正在使用的特定库准备工具包的最佳实践。此信息可在相应的产品支持页面找到。
使用存储库进行排序运行
对于任何存储时间超过参考指南中规定的推荐时间的Illumina库,Illumina建议在测序前进行重复的质量控制(QC)和定量。Re-QC是有益的,因为库在长时间存储期间可能降级,导致整体产量的损失。大多数Illumina图书馆推荐的QC方法总结在图书馆量化和质量控制快速参考指南支持公告。
对于需要基于珠子的标准化的库,Illumina建议将库存储在最后一个安全停止点,就在基于珠子的标准化步骤之前,正如协议指南中指定的那样。以双链DNA (dsDNA,在以珠子为基础的标准化之前)存储的库比以单链DNA (ssDNA,在以珠子为基础的标准化之后)存储的库更稳定。如果一个库在基于珠子的归一化之后被长期存储,Illumina建议对原始dsDNA库重复基于珠子的归一化。
英飞纳姆™试验注意事项
Te-Flow和Water Circulator:
- 确认水循环器中没有微生物生长,水处于适当的填充水平。
- 如果有微生物生长,请按照水的循环器手册(第57 - 60页)用于清洗循环水器,并在需要时用除藻剂进行刷新。
- 不要使用含氯漂白剂清洗循环水器。
- 检查Te-Flow和白色试剂锅的废管管线。如果需要的话,漂白剂可以从废物管道喷射到废物罐子里来清洁它们。
- 如果废瓶已倒空或移动,请确保其回到适当位置,使废物从Te-Flow试剂锅无阻碍地、重力驱动地流向废瓶。确保废管没有弯曲,没有“上坡”跑到废水瓶。
Tecan/Illumina自动移液系统(IAPS):
- 如果特康流体是干燥存储的,请重新填满系统水瓶。
- 如有必要,清空废液容器和一次性尖端废袋。
- 确保Te-Flow正确地放置在平底锅中,并且Te-Flow在Tecan甲板上的适当位置。
- 打开Tecan。
- 请参阅 中的以下部分无限分析实验室设置和程序指南机器人使用与维护 :
- 准备使用Infinium自动移液系统(最少进行两次漂白清洗)
- 请注意:如果系统在关闭前长时间闲置和/或干燥,则需要多次系统清洗循环来清除流体中的所有空气。
- 测试iap提示的体积准确性
iScan™
- 启动扫描器并确保在启动ICS软件之前,阿基米德驱动器出现在PC上。
- 用乙醇擦拭BeadChip载体和iScan Nest(放置载体的托盘),以清除任何灰尘或堆积的残留物。
- 在使用前至少30分钟打开扫描仪,给激光预热的时间。