Illumina链mRNA准备连接常见问题

该试剂盒适用于任何含有3 '端聚腺苷酸mRNA的物种。

Illumina绞合总RNA试剂盒与FFPE样品兼容，输入范围为10–100 ng RNA输入，DV200>55%。

RNA应用专门用于RNA的荧光法量化。

应使用DNA酶处理以确保样品纯度和准确定量。

热循环器必须具有加热盖温度设置，因为某些步骤要求将盖温度设置为40℃或70℃。此外，一个步骤需要0.1C/秒的梯度。确保您的热循环器符合这些要求。

对25-1000 ng总RNA (RIN≥7)进行优化。较低的投入和较低的质量会降低图书馆的产量。

平均片段长度约为350-400bp。预期的插入大小约为200-250 bp。

通过在第二链主混合物（SMM）中用DUTP替换DTTP来实现链特异性。在第二链合成中掺入DUTP在扩增期间有效地淬灭第二股，因为测定中使用的聚合酶不会掺入过这种核苷酸。该特异性伴随着向第一链主混合物ACT D（FSA）的放线菌素D添加，其在第一链合成期间防止杂散DNA依赖性合成，允许仅依赖于RNA依赖性合成。

Illumina建议使用安捷伦科技全球人类参考RNA（UHR）（目录#740000）作为阳性对照样本。

搁浅信息是通过连接的适配器的方向性来维护的。

这是不受支持的。

读取1个序列与DNA的反义链相同，其也是第一链cDNA（仅扩增第一链CDNA和测序）。

这个工具包主要针对mRNA和长链非编码rna。小的rna不会被捕获。

在RNA测序实验设计中，读长度和格式(单读与对端)是重要的考虑因素。下表提供了基于内部和外部数据的指导，但不代表严格的界限。单个项目的需求可能会根据多个变量以及用户偏好而变化。需要查阅文献以获得最新的资源。

• DRAGEN RNA管道-进行融合分析和RNA定量。
• RNA序列比对-比对RNA序列读取。量化基因表达，调用小变异和基因融合。差分表达式应用程序的输入。
• 从RNA-Seq比对结果中快速评估新的转录本亚型和基因表达水平。