在DNA片段破碎后,DNA片段被标记的dNTPs末端修复。DNA片段是环状的,非环状的DNA通过消化被去除。环状DNA被分割,标记的片段(对应于连接在一起的原始DNA的末端)被亲和纯化。纯化片段端部修复并连接到Illumina配对端部测序适配器。
将附加的与流细胞寡核苷酸互补的序列添加到带尾PCR引物的适配器序列中。最终制备的文库由两个DNA片段组成的短片段组成,这两个DNA片段最初被几千碱基分开。这些文库可以用于成对端簇生成,然后使用Illumina下一代测序(NGS)系统进行测序。
高效的协议使任何下一代平台的基因组多样性最高。
简单的工作流程,有限的动手时间和多个停止点。
起始原料只需1 μg。